一宇赁、設(shè)備和材料

1）Copure® MS HLB 96 孔板2）biocomma® 多功能混勻儀3）biocomma® 96 孔正壓提取裝置4）biocomma® 96 孔氮吹儀5）biocomma® 熱封膜儀

二蕴轩、儀器條件

儀器：Thermo Scientific TSQ Endura

色譜柱：CommaSil® C18 (2.1mm×100 mm, 3 μm) 柱溫：40℃

進(jìn)樣量：5 μL

流動(dòng)相：A：水（含0.1%FA） B：甲醇（含0.1%FA） 洗脫方式：梯度洗脫

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件

電噴霧電壓：3500 V 鞘氣壓力：15 arb

輔氣壓力：1 arb 離子傳輸管：360℃ 輔氣溫度：380℃ 離子化方式：ESI+

采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)

表2 各組分母離子和子離子檢測(cè)的離子對(duì)參數(shù)

三、實(shí)驗(yàn)步驟

3.1 樣本預(yù)處理

移取100 μL 血漿樣本于1.5 mL 的離心管中凳嘁，再加入25 μL 內(nèi)標(biāo)搁突，1800 rpm 渦旋1 min。然后加入200 μL 甲醇溶液溉潭，

1800 rpm 渦旋1 min净响。最后加入500 μL 水，1800 rpm 渦旋1 min喳瓣。將樣品在12000 rpm 離心5 min馋贤。

3.1 樣品凈化

1) HLB 板活化：分別加入200 μL 甲醇和200 μL 水到MS HLB 96 孔板中。

2) 上樣：取600 μL 預(yù)處理上清液至 96 孔板中畏陕，低壓力正壓條件下使樣液緩慢通過(guò)板孔配乓。

3) 淋洗：依次用200 μL 含0.1% 氨水的35% 甲醇溶液和

200 μL 含0.1% 甲酸的35% 甲醇溶液對(duì)板孔進(jìn)行淋洗，然后將HLB 96 孔板在正壓的氮?dú)鈼l件下干燥30S惠毁，以盡可能多的去除柱床中的溶劑犹芹。

4）洗脫：使用200 μL 乙腈- 甲醇（85：15）溶液，將分

析物由MS HLB 96 孔板中洗脫至96 孔收集板中。

3.2 氮吹復(fù)溶

將收集板于氮?dú)鈼l件下進(jìn)行吹干處理腰埂，吹干后先用30 μL 乙腈- 甲醇（85：15）溶液 進(jìn)行復(fù)溶飒焦，渦旋混勻后再加入70 μL 水，渦旋混勻屿笼。

3.3 上機(jī)檢測(cè)

將復(fù)溶液注入LC-MS/MS 系統(tǒng)中進(jìn)行檢測(cè)牺荠。

備注：① 沉淀劑中包含內(nèi)標(biāo)工作液，濃度和體積可根據(jù)實(shí)

         驗(yàn)室的方法進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整担擦。

  ② 標(biāo)準(zhǔn)曲線的前處理方法與樣本相同例杰。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1 回收率結(jié)果

表3 血漿中4 種類(lèi)固醇激素加標(biāo)回收率結(jié)果

從表3 可以看出侥丝，不同加標(biāo)濃度下，4 種目標(biāo)化合物都有較好的回收率榛湖。

表4 穩(wěn)定性對(duì)比結(jié)果

該部分實(shí)驗(yàn)從不同的生產(chǎn)批次中抽取MS HLB 96 孔板，對(duì)不同的孔位進(jìn)行測(cè)試疤嘴。從目標(biāo)化合物的結(jié)果可以看出融唬，該產(chǎn)品的穩(wěn)定性良好漾衅。

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